<<
>>

Технологическая схема исследования ядерной ДНК

Технологическая схема исследования ядерной ДНК включает следующие этапы: выбор объекта исследования, содержащего ДНК; выделение ДНК из объектов исследования; количественная и качественная оценка выделенной ДНК; полимеразная цепная реакция (ПЦР); электрофоретическое разделение продуктов ПЦР (электрофорез); интерпретация полученных данных (установление аллелей, математическая обработка данных, выводы); заключение эксперта.

Объекты исследования, содержащие ДНК. Наиболее частыми объектами исследования являются кровь, слюна и сперма. Пригодными для исследования являются также образцы мышечной ткани, костные останки и отдельные волосы. Более редкими объектами исследования становятся следы пота, перхоть и др.

Пригодными для исследования являются биологические объекты, загрязненные микрофлорой. При проведении исследований эксперты применяют видоспецифичные реагенты, что позволяет получать достоверные результаты исследования ДНК человека. ДНК других организмов не оказывает влияния на результаты исследования, однако при ее высоком содержании она становится ингибитором ПЦР.

Исследование может быть проведено и для биологического материала, произошедшего от двух или более лиц. Например, для объектов, содержащих сперму, используя метод дифференциального лизиса клеток, имеются возможности разделить ДНК спермы и ДНК других выделений и проводить их дальнейшее исследование как изолированных объектов.

Выделение и оценка ДНК, выделенной из исследуемых биологических объектов. Выделение ДНК является важным этапом

экспертизы по исследованию ДНК. Основными методами выделения биологических объектов в настоящее время являются: метод, основанный на использовании ионообменной смолы Chelex 100; метод выделения и очистки с помощью органических соединений, таких, как фенол и хлороформ (фенольный метод); метод выделения и очистки с помощью веществ, абсорбирующих ДНК, таких как соединения кремния (Silica) или синтетические сорбенты.

При выборе метода выделения следует учитывать вид объекта, его состояние, давность образования и условия хранения.

Метод выделения ДНК с использованием Chelex 100 обычно применяют, когда исследуемый объект не содержит больших количеств белков, не подвергался длительному хранению и его клетки легко лизируются. Положительным качеством метода является то, что выделение ДНК этим методом не требует применения токсичных реактивов и проводится в течение относительно короткого времени. Процедура выделения ДНК включает в себя небольшое количество шагов, что потенциально снижает вероятность перекрестной контаминации ДНК между разными объектами. Недостатками метода являются невысокая степень очистки ДНК от белковых примесей, которые могут являться ингибиторами ПЦР и невозможность автоматизации процесса выделения. Ионообменную смолу Chelex 100 обычно применяют при работе с кровью, спермой и слюной (рис. 4.1).

Рис. 4.1. Набор ReadyAmp Genomic DNA Purification System (5% Chelex 100)

Рис. 4.1. Набор ReadyAmp Genomic DNA Purification System (5% Chelex 100)

41

Этим методом также допустимо выделять ДНК из волос, пота, перхоти и других объектов. Недопустимыми объектами следует считать зафиксированную или гемолизированную кровь, биологические объекты на предметах-носителях, содержащих ингибиторы ПЦР (красители, гуминовые кислоты и др.), мышечные и костные ткани.

Фенольный метод является универсальным, т.е. данный метод может быть применен для выделения ДНК практически из любых объектов, содержащих ДНК. При использовании этого метода происходит наиболее полное удаление белков и различных клеточных компонентов, в результате чего удается получить ДНК высокой степени очистки, которая пригодна для длительного хранения. К недостаткам метода относятся необходимость применения высокотоксичных реактивов, длительность процедуры выделения ДНК и невозможность автоматизации процесса выделения.

Кроме этого, при использовании фенольного метода часть ДНК, содержащаяся в исследуемом объекте, может теряться. Поэтому этот метод особенно эффективен, когда объект содержит относительно большое количество ДНК. Фенольный метод является традиционным для выделения ДНК из костных и мышечных тканей (рис. 4.2).

Рис. 4.2. Мельница для перемалывания костного материала

Рис. 4.2. Мельница для перемалывания костного материала

Метод выделения ДНК с использованием абсорбирующих веществ в последнее время получает все большее распространение в экспертной практике. Он может быть применен для выделения ДНК практически из любых объектов, содержащих ДНК. Данный метод не требует применения токсичных реактивов и может быть автоматизирован. В отличие от фенольного метода, при котором очистка экстракта происходит за счет удаления из него белковых примесей, в данном случае из экстракта удаляют (абсорбируют) саму ДНК, которую затем элюируют в специальном буфере (рис.

4.3).

Рис. 4.3. Набор DNA IQ System

Рис. 4.3. Набор DNA IQ System

Применение данного метода для выделения ДНК из биологических объектов способствует более вероятному получению ДНК, свободной от ингибиторов ПЦР. В результате получают ДНК высокой степени очистки, которая пригодна для длительного хранения. Однако часть ДНК, содержащаяся в исследуемом объекте, на этапах абсорбции и элюции может теряться. К недостаткам метода следует отнести необходимость применения специального оборудования. Также этот метод является наиболее дорогостоящим. В настоящее время данный метод выделения ДНК особенно эффективен, когда имеется необходимость получения ДНК высокой степени очистки, не содержащей ингибиторы ПЦР. В дальнейшем,

при возрастании объемов исследования и возникновении необходимости автоматизации этого этапа исследования метод выделения ДНК с использованием абсорбирующих веществ может стать основным методом выделения ДНК. 

<< | >>
Источник: И.В. Стороженко, А.Ю. Культин, В.Г. Никитаев, А.Н. Проничев, Е.Ю. Бердникович. Компьютерные технологии в судебно-генетической экспертизе. 2010

Еще по теме Технологическая схема исследования ядерной ДНК:

  1. 1.4. Инновационный процесс как объект управления
  2. 4.1. Уровень технологий
  3. Соглашение о Партнерстве и Сотрудничестве Полный текст соглашения, подписанного 24 июня 1994 года на о. Корфу между Европейским Союзом и Российской Федерацией
  4. § 1. Главные параметры соотношения сил и взаимодействия в треугольнике США — Западная Европа — Япония
  5. Глава 7 НА ПОРОГЕ ГЛОБАЛЬНОГО ИНФОРМАЦИОННОГО ОБЩЕСТВА
  6. Глава 12 МЕХАНИЗМ ФОРМИРОВАНИЯ ПОЗИТИВНОГО ОБРАЗА РОССИИ
  7. ЗАПАДНАЯ ПОЛИТОЛОГИЯ XX в.
  8. 4.1. Уровень технологий
  9. 3. НАУКА И ТЕХНИКА
  10. 2. ПРОБЛЕМЫ ПОСЛЕВОЕННОЙ ИСТОРИИ США В СОВРЕМЕННОЙ АМЕРИКАНСКОЙ ИСТОРИОГРАФИИ
  11. Эпоха Интернета
  12. Технологическая схема исследования ядерной ДНК
  13. Глава 1 ПОНЯТИЕ МЕТОДОЛОГИИ КАК ОБЩЕНАУЧНОГО ФЕНОМЕНА
  14. Производство плутония и трития для ядерного оружия
  15. Разработка ядерных зарядов и боеприпасов
  16. Технопарки за колючей проволокой
- Авторское право - Аграрное право - Адвокатура - Административное право - Административный процесс - Акционерное право - Бюджетная система - Горное право‎ - Гражданский процесс - Гражданское право - Гражданское право зарубежных стран - Договорное право - Европейское право‎ - Жилищное право - Законы и кодексы - Избирательное право - Информационное право - Исполнительное производство - История политических учений - Коммерческое право - Конкурсное право - Конституционное право зарубежных стран - Конституционное право России - Криминалистика - Криминалистическая методика - Криминальная психология - Криминология - Международное право - Муниципальное право - Налоговое право - Наследственное право - Нотариат - Образовательное право - Оперативно-розыскная деятельность - Права человека - Право интеллектуальной собственности - Право собственности - Право социального обеспечения - Право юридических лиц - Правовая статистика - Правоведение - Правовое обеспечение профессиональной деятельности - Правоохранительные органы - Предпринимательское право - Прокурорский надзор - Римское право - Семейное право - Социология права - Сравнительное правоведение - Страховое право - Судебная психиатрия - Судебная экспертиза - Судебное дело - Судебные и правоохранительные органы - Таможенное право - Теория и история государства и права - Транспортное право - Трудовое право - Уголовное право - Уголовный процесс - Философия права - Финансовое право - Экологическое право‎ - Ювенальное право - Юридическая антропология‎ - Юридическая периодика и сборники - Юридическая техника - Юридическая этика -