ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ ТЕСТ МОЧИ, КАК ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЙ МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ ГРУППЫ ОПИЯ С.С. Катаев, В.П. Гаранин, И.Ю. Смирнова Пермь


Анализ мочи от живых лиц на алкалоиды группы опия, либо на наркотические вещества становится все более частым предметом судебно-химического исследования. При этом в качестве предварительного испытания требуется простой, чувствительный, специфичный и быстрый метод, позволяющий решить вопрос наличия, либо отсутствия определенной группы веществ и направленности дальнейшего исследования образца. Нами проведена сравнительная оценка использования методов иммунохроматографического анализа (ИХА) и тонкослойной хроматографии (ТСХ), как предварительного метода анализа мочи на наличие алкалоидов группы опия. В качестве подтверждающего метода использовали хромато- масс-спектрометрию (ГХ/МС).
Метод ИХА является одностадийным иммуноферментным тестом и основан на конкурентном связывании исследуемого вещества на мембране иммунохроматографического абсорбционного устройства.
Исследование проводилось в сравнении с традиционным анализом на алкалоиды группы опия - методом ТСХ после кислотного гидролиза мочи и жидкость-жидкостной экстракции.
Материалы и оборудование. Реактивы и растворители градации хч. Реактивы Марки и Фреде свежеприготовленные. В качестве метчиков для ТСХ использовали 1% спиртовые растворы морфина гидрохлорида (ФС 413 ГФ X) и кодеина основания (ФС 170 ГФ X). Пластинки для ТСХ - “Сорбфил- ПТСХ-В-УФ” (ЗАО “Сорбполимер”, Россия). Иммунофермент- ные тесты для качественного экспресс-определения опиатов в моче DRuG Screen OPIATES Test (DRG International Ink, США) регистрационное удостоверение МЗРФ № 98/1415 от 27.10.98 на диагностический набор реагентов для экспресс- диагностики содержания наркотических веществ в моче. Термоблок ПЭ-4030 (ОАО “Экрос”, Россия). Газовый хроматограф НР5890 серии II с масс-селективным детектором НР5972А (Hewlett-Packard, США).
Процедуры и методы. ИХА исследование. Исследование проводили в соответствии с прилагаемой инструкцией.

Во флакон помещали 2 мл мочи, контролировали рН по универсальной индикаторной бумаге, доводили температуру до комнатной. В мочу помещали тестовую пластинку, через 30 секунд пластинку вынимали и помещали на ровную горизонтальную поверхность. Результат определяли в интервале 5-10 минут. При наличии одной окрашенной полосы в контрольной зоне фиксировали положительный результат. При наличии двух полос в контрольной и тестовой зонах фиксировали отрицательный результат.
Извлечение. К 10 мл мочи прибавляли 2 мл концентрированной соляной кислоты, флакон плотно закрывали и выдерживали 20 минут на кипящей водяной бане. После охлаждения гидролизат фильтровали через бумажный фильтр. К фильтрату прибавляли 25% водный раствор аммиака до рН9-10 и дважды экстрагировали смесью хлороформ-н-бутанол (9:1) порциями по 10 мл.
Органические фазы отделяли, объединяли и фильтровали через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Фильтрат упаривали до объема 8-9 мл, доводили до 10 мл хлороформом и разделяли на две аликвоты, соответствующие 8 и 2 мл мочи. Аликвоты экстракта упаривали досуха в токе теплого воздуха (60оС).
ТСХисследование. Сухой остаток аликвоты извлечения из 8 мл мочи растворяли в 100 мкл этанола и наносили поровну в стартовые зоны 1 двух хроматографических пластин, в зоны 2 наносили спиртовые растворы метчиков морфина и кодеина. После высыхания пятен, пластинки элюировали в системе растворителей этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17:2:1). Предварительное насыщение камеры 30 минут. Длина пробега элюента 8 см. Хроматограммы высушивали. Первую пластинку проявляли реактивом Марки (капель- но). Вторую - реактивом Фреде (капельно). При наличии окрашенных зон на уровне пятен метчиков морфина (краснофиолетовое пятно с hRf 24±2) и/или кодеина (синее пятно с hRf 33±3) фиксировали положительный результат.
ГХ/МС исследование. Сухой остаток аликвоты извлечения из 2 мл мочи растворяли в 1 мл хлороформа и реэкстраги- ровали 1 мл 0.1 н раствора соляной кислоты в течение 5 минут. Хлороформный слой отбирали и отбрасывали. К водной фазе прибавляли 0,5 г сульфата аммония и 25% водный раствор аммиака до рН 9-10, затем экстрагировали 2 мл смеси хлороформ-н-бутанол (9:1). Органическую фазу отбирали, переносили во флакон и упаривали досуха. К сухому остатку

прибавляли 100 мкл безводного пиридина и 100 мкл уксусного ангидрида. Флакон герметично укупоривали и нагревали в термоблоке 20 минут при 60оС. После охлаждения, флакон вскрывали и упаривали растворитель досуха. Сухой остаток растворяли в 100-200 мкл метиленхлорида и 1 мкл вводили в инжектор хроматографа. Температура инжектора 250оС. Капиллярная кварцевая колонка НР-5МБ 25 м Х 0,25 мм. Скорость потока газа носителя - гелия 1,5 мл/мин, без деления потока. Температура колонки программируемая: 2 минуты при 70оС с дальнейшим повышением до 270оС со скоростью 20оС/ мин, общее время анализа 20 минут. Температура интерфейса МСД 280оС. Ионизация электронным ударом с энергией электронов 70 эВ. Режим работы МСД - полное сканирование ионов от 45 до 450 атомных масс. Положительный результат фиксировали при наличии в хроматограмме ацетилированных производных морфина и/или кодеина. Время удерживания аце- тилкодеина 12,74 минуты (RI 2610), диацетилморфина 13,46 минуты (RI 2738). Чувствительность для морфина и кодеина не хуже 50 нг/мл мочи, для каждого.
<< | >>
Источник: В.И. Витер.. Актуальные аспекты судебной медицины. - Выпуск VII.. 2001

Еще по теме ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ ТЕСТ МОЧИ, КАК ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЙ МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ ГРУППЫ ОПИЯ С.С. Катаев, В.П. Гаранин, И.Ю. Смирнова Пермь:

  1. 2. МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ, ФИКСАЦИИ И ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВЕЩЕСТВЕННЫХ ИСТОЧНИКОВ ИНФОРМАЦИИ (МЕТОДЫ ПОЛЕВОЙ КРИМИНАЛИСТИКИ)
  2. Обнаружение и исследование слюны, мочи, пота
  3. Непрямой метод опроса с использованием полиграфа (тест “виновных знаний" или тест “скрываемой информации”)
  4. ОСОБЕННОСТИ КВАЛИФИКАЦИИ УБИЙСТВ, СОВЕРШЕННЫХ ГРУППОЙ ЛИЦ И ГРУППОЙ ЛИЦ ПО ПРЕДВАРИТЕЛЬНОМУ СГОВОРУ
  5. 3. МЕТОДЫ И ТЕХНИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА ОБНАРУЖЕНИЯ И ФИКСАЦИИ СЛЕДОВ РУК И НОГ
  6. 2. Хищение по предварительному сговору группой лиц
  7. 13.2. Методы обнаружения и фиксации следов рук
  8. Совершение преступления по предварительному сговору группой лиц
  9. Репертуарный тест ролевых конструктов (Реп-тест)
  10. Совершение преступления группой лиц при отсутствии предварительного сговора
  11. Квалификация продолжаемых хищений, совершенных по предварительному сговору группой лиц
  12. 11. Социальная группа как одна из общих форм социального взаимодействия. Типы рабочих групп.
  13. 7.2. СЛЕДЫ СПЕРМЫ, МОЧИ И СЛЮНЫ
  14. КАК ИЗМЕРИТЬ ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ «Я»: ТЕСТ НЕЗАКОНЧЕННЫХ ПРЕДЛОЖЕНИЙ, РАЗРАБОТАННЫЙ Д. ЛОВИНДЖЕР
  15. РЕП-ТЕСТ ДЛЯ ДЕТЕЙ: КАК ОНИ КОНСТРУИРУЮТ ЛИЧНОСТЬ?
  16. Средства и методы предварительного и экспертного исследования
  17. Метод фокус-группы
  18. Метод номинальных групп
  19. § 3. Методы и средства предварительного и экспертного исследования вещественных доказательств